北美水貂源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测（二）

2.3分离菌的生化鉴定

生化鉴定结果显示，分离菌枸橼酸盐，d-葡萄糖，赖氨酸脱羧酶和鸟氨酸脱羧酶试验均为阳性。个别菌株可发酵麦芽糖、甘露醇。吲哚、尿素酶、丙二酸盐等试验均为阴性。ATB自动生化鉴定系统判定结果均为沙门氏菌，评定符合率均在99%以上。

2.4分离菌的16SrDNA鉴定

将测序结果用NCBI的BLAST分区检索，发现分离菌株与沙门氏菌属的参考菌株同源性达97%—100%。结合上述鉴定结果，综合判定9株分离菌为沙门氏菌，命名为SDS1-9。

2.5分离菌的致病性试验

分离菌感染小鼠后，小鼠出现明显的神经症状，表现为站立不稳，眯眼，抱爪蜷缩，个别小鼠出现粪便稀软，呼吸急促症状。感染组小鼠出现死亡，死亡个数1—5个，死亡率20%—100%(图2)。对照组小鼠无发病症状，无死亡。分离感染组小鼠肝脏、脾脏、心脏细菌，经鉴定分离出沙门氏菌。

2.6分离菌的药物敏感性试验

药物敏感性试验结果显示，分离菌株分别对5—11种抗生素耐药，对2—5种抗生素表现中介，对2—8种抗生素敏感(图3)。15种抗生素中无对头孢曲松和阿米卡星表现耐药的菌株，其余13种抗生素的耐药率11.11%—100%，其中氟苯尼考、替米考星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶和复方新诺明的耐药率高达100%。土霉素敏感率最高，为88.89%(8/9)(图4)。对5种抗生素耐药菌株1株，对6种抗生素耐药菌株2株，对7种抗生素耐药菌株1株，对8种抗生素耐药菌株3株，对9种抗生素耐药菌株1株，对11种抗生素耐药菌株1株，分离菌株均具有多重耐药性。

3讨论

Williams等报道英国的12个养殖场316只病死貂中沙门氏菌患病率0.6%，Dietz等报道由于饲料污染导致丹麦25个水貂养殖场水貂出现流产死胎，上述报道均表明在水貂养殖中沙门氏菌是重要的细菌性致病原。我国毛皮动物养殖起步较晚，但发展迅速，养殖数量和密度较大，存在养殖技术相对落后，管理粗放等问题，致使动物发病率较高，尤其是细菌性疾病，给养殖场造成严重的经济损失。本文对65份病死水貂病料中的沙门氏菌进行分离鉴定，分离率为13.85%，并通过小鼠致病性试验发现分离菌株均具有一定的毒力。李鹏用多重PCR方法检测268份水貂胴体及内脏组织，沙门氏菌检出率0.75%(2/268)；刘亭亭从2009—2017收集的水貂病料中检测出5株沙门氏菌。在李和刘亭亭报道均有沙门氏菌检出，但检出率均比本文低，这可能与检测方法和病料来源、时间等条件不同有关。

沙门氏菌有多种耐药性产生机制，并可通过多种方法从环境中获得耐药性，给沙门氏菌病的防治造成困难。本文对9株水貂源沙门氏菌的耐药性进行研究，发现多重耐药菌株高达100%，而试验的15种抗生素中有5种抗生素耐药性达100%，表明分离菌株耐药情况较为严重，且部分抗生素对分离菌株未表现出抗菌效果。据孙娜等报道，其分离的7株水貂源沙门氏菌具有多重耐药现象，对头孢曲松、左氧氟沙星、氟苯尼考和多黏菌素较敏感，对氨基糖苷类药物、四环素和氨苄西林表现为耐药。据王海龙等报道，其分离的水貂源沙门氏菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星、克林霉素、头孢曲松钠高敏，对万古霉素、硫酸黏菌素中敏，对丁胺卡那霉素、氨苄西林、庆大霉素低敏。在本文与孙娜等、王海龙等的报道中，水貂源沙门氏菌均存在多重耐药现象，且耐药情况不同，这可能是由于时间、饲养与治疗方式不同造成的。在临床治疗水貂沙门氏菌病时，建议可先通过药物敏感性试验筛选出最佳的抗菌药物，制定合理的给药方案，避免长期大剂量使用抗生素，减少养殖户的经济损失。

本文对秦皇岛地区水貂源沙门氏菌进行分离鉴定，分离率13.85%(9/65)；对分离菌株的致病性及耐药性进行研究，发现分离菌均具可致小鼠出现不同程度死亡，并分别对5—11种抗生素药物耐药，氟苯尼考、替米考星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶和复方新诺明的耐药率高达100%，耐药情况较为严重，为该地区水貂沙门氏菌病的预防和治疗提供参考。

相关链接：硫酸黏菌素，沙门氏菌，克林霉素