食品添加剂的测定之防腐剂的测定（四）

(2)试剂：

所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。

①甲醇：经滤膜(0.5μm)过滤。

②稀氨水(1+1)：氨水加水等体积混合。

⑧乙酸铵溶液(0.02 mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。

④碳酸氢钠溶液(20g/L)：称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。

⑤苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/mL)5mL加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为lmg/mL，作为储备溶液。

⑥山梨酸标准储备溶液：准确称取O.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

⑦苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。经滤膜(0.45μm)过滤。

3、分析步骤

(1)样品处理

①汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH约7。加水定容至20mL，混匀，经滤膜(0.45μm)过滤，滤液备用。

②果汁类：称取5.00～10.Og样品，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至20mL，离心沉淀，上清液经滤膜(0.45μm)过滤，滤液备用。

③配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至20mL，经滤膜(0.45μm)过滤，滤液备用。

(2)高效液相色谱参考条件

①色谱柱：YWG—C₁₈ 4.6mm×250mm，填料粒径l0μm，不锈钢柱。

②流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5:95)。

③流速：1mL/min或2mL/min。

④检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.20或0.10 AUFS。

⑤进样量：10μL。

(3)测定

①标准曲线和标准色谱图

用微量进样器取5μL或者l0μL混和标准液注入进样口中，经分析后得到标准溶液色谱图，根据峰面积或峰高对应含量制作标准曲线。

②样品的定性和定量

用微量进样器取5μL或者101μL混和标准液注入进样口中，根据峰保留时间定性，按峰面积或峰高定量，定性和定量工作由数据处理机自动进行，并打印出测定结果。

5、说明及注意事项

①此法还可以同时测定糖精钠。

②被测溶液pH对测定和色谱柱使用寿命均有影响，pH＞8或pH＜2时影响被测组分的保留时间，对仪器有腐蚀作用。以中性为宜。

⑧测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠也可以用MicroPAK CN-10 4mm×300mm柱，流动相可用甲醇-水。

④山梨酸的灵敏波长为254nm，在此波长测苯甲酸和糖精钠灵敏度较低，苯甲酸和糖精钠灵敏波长为230nm，为照顾三种被测组分灵敏度，方法采用波长为230nm。

⑤对共存物进行干扰试验表明：蔗糖在230nm处无吸收，柠檬酸吸收很小，在此色谱条件下，咖啡因和人工合成色素不被洗脱，因此，这些共存物不影响苯甲酸、山梨酸、糖精钠的定性、定量测定。

参考资料：食品中有毒有害物质检测

相关链接：乙酸铵，碳酸氢钠，苯甲酸，山梨酸