抗氧化剂的测定(二）

(二)分光光度法

1、原理

样品通过水蒸气蒸馏，使BHT分离，用甲醇吸收，遇邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色，用三氯甲烷提取，与标准比较定量。

2、试剂

①无水氯化钙。

②甲醇。

③三氯甲烷。

④亚硝酸钠溶液：3g/L，避光保存。

⑤联邻二茴香胺溶液：称取125mg邻联二茴香胺于50mL棕色容量瓶中，加25mL甲醇，振摇使全部溶解，加50mg活性炭，振摇5min，取20mL滤液，置于另一50mL棕色容量瓶中，加盐酸(1+11)至刻度。临用时现配并避光保存。

⑥BHT标准溶液：准确称取0.050gBHT，用少量甲醇溶解，移入lOOmL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0.50mgBHT。

⑦BHT标准使用液：临用时吸取1.0mL的BHT标准溶液，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于10.0μgBHT。

3、仪器

水蒸气蒸馏装置；甘油浴；分光光度计。

4、操作方法

(1)样品处理：称取2～5g样品(约含0.40mgBHT)于100mL蒸馏瓶中，加16g无水氯化钙粉末及10mL水，当甘油浴温度达到165℃恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发生装置及冷凝管，冷凝管下端浸入盛有50mL甲醇的200mL容量瓶中，进行蒸馏，蒸馏速度每分钟1.5～2mL，在50～60min内收集约lOOmL馏出液(连同原盛有的甲醇共约150mL，蒸气压不可太高，以免油滴带出)，以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。

(2)测定：准确吸取25mL上述处理后的样品溶液，移入用黑纸(布)包扎的lOOmL分液漏斗中，另准确吸取0.OmL，1.0mL，2.OmL，3.OmL，4.0mL，5.OmL BHT标准使用液(相当于Oμg，10μg，20μg，30μg，40μg，50μgBHT)，分别置于黑纸(布)包扎的60mL分液漏斗，加入甲醇(50％)至25mL。分别加入5mL邻联二茴香胺溶液，混匀，再各加2mL亚硝酸钠溶液(3g/L)，振摇1min，放置10min，再各加lOmL三氯甲烷，剧烈振摇lmin静置3min后，将三氯甲烷层分入黑纸(布)包扎的10mL比色管中，管中预先放入2mL甲醇，混匀。用lcm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。

参考资料：食品中有毒有害物质检测

相关链接：抗氧化剂，甲醇，亚硝酸钠，三氯甲烷