金黄色葡萄球菌定性检验

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属 （Staphylococcus),是革兰氏阳性菌的代表。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径约 0.8mm，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、无鞭毛，大多数无荚膜。金 黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度 37℃，最适生长pH7.4。有高度的耐盐性，可在7.5%~15%NaC1肉汤中生长。

金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其他环境中。在人类和动物 的皮肤与外界相通的腔道中，也经常有此菌存在。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水 分较多的食品，在合适的温度环境下，此菌可大量繁殖并产生肠毒素，由于肠毒素可耐受 100℃的高温30min而不被破坏，人食用后会出现严重的腹泻、肠炎甚至死亡，是一种重 要的危害人类健康的细菌毒素。

 1.检验程序

  检验程序见下图。

2.操作步骤

2.1样品的处理 称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 的无菌均质杯内，8000~10000r/min均质1~2min，或放入盛有225mL7.5%氯化 钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1~ 2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯 化钠胰酪除大豆肉汤的无菌锥形瓶（（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡 混匀。

 2.2增菌和分离培养

 2.2.1将上述样品匀液于36±1℃培养18~24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氮化 钠肉汤中呈混浊生长，严重时在10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤内呈混浊生长。

2.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板（或显色培养 基）上，血平板36士1℃培养18~24h；Baird-Parker平板36士1℃培养18~24h或 45~48h；显色培养基，按相关产品的使用指南进行。

2.2.3金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2~3mm，颜色呈灰色 到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落 有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡 些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄 色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。显色培养基平板，按产品使用指 南辨别典型菌落。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

2.3鉴定

2.3.1染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5~1μm。

2.3.2血浆凝固酶试验：挑取Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mlBHI和营养琼脂小斜面，36士1℃培养18~24h。取新鲜配置免血浆0.5mL，放入小试管中，再加入BHI培养物0.2~0.3mL，振荡摇匀，置36士1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，36士1℃培养18~48h，重复试验。

2.4葡萄球菌肠毒素的检验可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。

3.结果与报告

3.1结果判定：符合2.2.3、2.3，可判定为金黄色葡萄球菌。

3.2结果报告：在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。

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