5种天然植物提取物中4种多环芳烃的HPLC—FLR测定方法（四）

用姜黄提取物。精确称取0.4～0.59姜黄素样品(精确至0.000lg)于10mL试管中，用5mL丙酮溶液涡旋提取2min后，用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中，再用5mL丙酮涡旋提取1min，用1mL移液枪将上清液转移至100mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪浓缩至尽干，氮气吹干，3mL正己烷和0.5mL丙酮溶解，样品液待净化。依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱；将待净化液加入SPE小柱，再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入；用3mL正己烷淋洗，待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗；用10mL二氯甲烷洗脱。收集洗脱液，旋转蒸发仪浓缩至近干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。样品液装小瓶后进行色谱检测，计算加标回收率，结果见表4。在3个添加水平下，万寿菊提取物在加标回收率在62.15％～100.12％之间I番茄菊提取物在加标回收率在62.50％～80.12％之间；葡萄籽提取物在加标回收率在99.27％～106.87％之间l绿咖啡豆提取物在加标回收率在65.88％～80.49％之间；姜黄提取物在加标回收率在75.54％～88.15％之间。

5、精密度验证

取万寿菊提取物、番茄提取物、葡萄籽提取物、绿咖啡豆提取物和姜黄提取物样品各1批，收集液使用旋转蒸发仪浓缩至近干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。收集液使用旋转蒸发仪浓缩至尽干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。绿咖啡豆提取物用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中，葡萄籽提取物用60℃～80℃水浴加热溶液，使正己烷层溶解，再用移液枪将上层正己烷转移至圆底烧瓶中，用正己烷重复萃取1次，合并正己烷溶液。氮气将正己烷吹干，用2mL88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。依次用5mL二氯甲烷、5mL正己烷活化SPE小柱；将待净化液加入SPE小柱，再用2mL正己烷荡洗圆底烧瓶后继续加入；用3mL正己烷淋洗，待淋洗液流完之后继续加人3mL正己烷淋洗；用10mL二氯甲烷洗脱。收集洗脱液，旋转蒸发仪浓缩至近干，氮气吹干，用2mL 88％乙腈水溶液准确定容，超声溶解，样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜，装小瓶进样检测。在1.3条件下进行色谱分析，每批样品一天之内连续测定5次并连续测定5 d，计算方法的日内、日间精密度，结果见表5。方法检测万寿菊提取物样品日内相对标准偏差在11.23％～14.26％之间，日间相对标准偏差在16.83％～18+26％之间；检测番茄提取物样品日内相对标准偏差在11.73％～17.03％之间，日间相对标准偏差在17.05％～19.56％之间；检测葡萄籽提取物样品日内相对标准偏差在1.21％～3.80％之间，日间相对标准偏差在3.83％～7.55％之间；检测绿咖啡豆提取物样品日内相对标准偏差在1.59％～5.41％之间，日间相对标准偏差在6.36％～11.29％之间；检测姜黄提取物样品日内相对标准偏差在4+51％～16.83％之间，日间相对标准偏差在10.40％～19.48％之间。
 

三、结论

通过对实验中所用试剂、器具及玻璃器具清洗方式进行系统排查与验证，排除了污染空白试样的因素，确定了试验用试剂、器具及玻璃器具的清洗方式。同时根据5种天然植物提取物的不同性质，优化和验证不同的净化方法，针对5种天然植物提取物分别建立了不同的前处理方法。并按照确定的色谱条件和前处理方法，研究方法的线性范围、检出限、定量限、准确度和精密度等技术指标。实验结果表明：4种多环芳烃在0.0l～8.0pg／l(g范围内呈良好线性关系，相关系数R2为1.0000，仪器检出限为0.01μg／kg，定量限为0.04μg／kg，相对标准偏在20％以内，加标回收率在60％～110％之间。该方法适用性强，检测准确度高，实现了5种天然植物提取物中4种多环芳烃的检测。

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