不同溶剂同时蒸萃取艾叶挥发油的抑菌活性

艾草(Ardeamtisiarargyi)，别名：香艾.G艾.艾高。艾草是多年生草本或略成半藏未状植物，植株有浓烈香气。分和广，除极干早与商寒地区外，遍及全国叫《本草纲目》记载“薪艾"可人药，其植株高大，香气浓烈，叶厚纸质，被毛密而厚。艾叶是传统的中医药原料，不仅可改善哮咐.咳嗽，亦能疏通血液吧。而实现这些功效的物魇主婆是艾叶挥发油。理已有众多科学研究表明艾叶挥发泊能快速缓解哮崎浮病状，并且其对金黄色葡萄球菌、痢H芽冠杆菌、枯草芽蘸轩菌、伤寨钎菌、大肠钎菌和假单煦菌等常见的微生物的生长具有显著的抑制作用P。但艾叶挥发油的化学成分不仅十分复杂而且种类繁多，不同的提取方铉会对精油的成分造成很太的差异，因此采取适当的提取条性，最大程度地张得其中的抑菌成分，是艾叶开发利用的基础。

目前，对于艾叶抨发性油的化学成分及其生物活性已有一些报道，但对提取工艺优化研究的报道较少并且局限于水蒸气蒸馏.有机溶剂渗漉法，超临界CO，等传统提取法，这些方法在提取艾叶挥发性油的过程中，存在挥发性油有效成分的破坏，有机溶剂难以分离，撵作难度大成本高等问题。同时蕊俯装取(SDE)在挥发油提取上具有明显的优势，集合水蒸气蒸馏及溶剂萃取的优点.提取时间短.溶剂使用少，使得样品的挥发蒸汽和溶剂反复混合，达到充分提取的效果F。同时蒸馏萃取虽然早在1946年就被发明使用，但并没有广泛的应用到挥发油的萃取中来。

因此充分的利用这种方法，将其应用到艾叶挥发油的提取上来，必将会促进艾叶的开发应用。作者采用二氯甲烷和正己烷②种溶剂，通过同时蒸馏萃取获得艾叶挥发油，进而研究挥发性油对常见微生物的抑菌活性，并对挥发油采用气相色诺结合质借(GC-MS}的方法进行成分分析，以及通过扫指电镜(SEMI)来现测微生物细庭形态的变化，比较不同工艺的差异。对比传统的水蒸气蒸馏的方法，从而挑选出艾叶挥发油的较优提取工艺，深入研究艾叶挥发油的提取工艺和挥发性油的抗菌活性，为雯叶的综合开发利用提供了实验数据。

1材料与方法

1.1材料与设备

艾叶，购于湖北省，二氧甲烷和正已烷为分析纯，培养基及相应实验耗材均购于国药集团化学试剂有限公司。gilenl6890N-5973i气相色谐—质谐联用仪色谐柱：DB-WAX毛细管柱，30.0m×250umx0.25um3.Agzileant7890N-5875i色谐柱，HP-5毛细管柱，30.0mx250umx0.25um)，美国安捷伦科技有限公司产品，同时焘馏萃取装置，上海药信化玻仪器有限公司产品。

革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538.枯草芽孢杆菌CMCCB63501，单一李斯特菌ATCC19115，革兰氏阴性菌，大肠杆菌ATC12900，变形杆菌CMCCB49027肠炎沙门氏菌ATCC13076，菌，熙曲毒ATCC6633，酿酒酵母ATCC9763，以上菌种均由上海理工大学医疗器械与食品学院提供，并于-8O℃存放。

1.2艾叶挥发油提取

1.2.1农蒸气蒸馏提取

依据权美平的研兖，称取100g艾叶原料，放入2000mL圆底烧框中，加入l500ml去离子水，加热煮沸，3h后，收集提取物，计算提取率。低温密封保存，留用。挥发泊奘取率%=交等演d*l%其中m表示质量。

1.2.2问时蒸喑萃联同时蒸馏萃取

使用图1所示装置，阻装好同时蒸帽萃取装置，参照夏雪婿""的方法，称取100g艾叶原料，放人2000mL圆底烧框中，加人1500mL.的去离子水，量取25mL二氯甲烷加人100mL圆底烧瓶中，开始加热。萃取3h后，收集提取物，犍用此转蒸发仪浓缩后，计算提取率，低温密封保存，留用。将二氯甲烷换为正已烷，重复上述择作。萃取3h后，收集提取物，使用旋转焘发仪浓缩后，计算提取率.低湿密封保存，留用。

1.3抑菌活性

挥跤油的成分决筮其抑菌活性，耐不同提取工艺会对挥发油成分产生很大的影响，因此对以上张得的3种挥发韵进行目标菌种的抑菌活性研究，分析提取工艺对抑菌活性的影阐.

1.3.1抑菌圈试验

啜取IO0L活化后的金黄色葡萄球菌菌液均匀涂布到营养琼脂固体培养基上，将培养基等分成4个区域.在各个区域中间放置准备好的直径6mm的滤纸片，移液怆吸取10ul水蒸气蒸馏提取物滴至滤纸片中间，迅速盖上培养皿盖，用密封膜密封，放置培养箱中，37°C培养24h.2种溶剂体系下的同时燕馏萃取物重复以上步骤，观.察结果。其它菌种选择相应的培养基和培养条件，重复以上步骤，获得抑菌圈实验结果则。

1.3.2最低抑筒浓度

将3种挥发油提取物用体积分数50%的乙醇由50uL/mL起，二倍稀释10个浓度梯度，至0.05μL/mL，吸取100μL活化后金黄色葡萄球菌菌液以及等量的相应梯度猿度的提取物，混合均匀后，均匀徐布到营养琼脂培养基上，迅速盖上培养皿盖，用密封膜密封，故置培养箱中，37°C培养24h，观察结果。其它菌种选择相应的培养基和培养条件，重复以上步骤。获得抑菌圈实验结果中。

1.4GC-MS成分分析

色谱柱型号：HP-5MS30mx0.25mmx0.25μm，柱温程序：起始温度50C保持1min，以4C/min速度升温至200°C，保持1min，再以20°Cmin的速度升温至280°C保持至完成分析：进样口温度250°C，载气为He，流速为1ml/min，进样量1μ山，分流比为40、1、70eV电子轰击离子源。离子源温度230°C，四极杆温度150°C，接口温度280°C，溶剂延迟5min，质量范围10-550amws

1.5扫描电镜SEM微生物形态变化观察

收集以上最低抑菌浓度测定实验后的样品，在3000r/min的条件下离心15min，收集沉淀，加入pH7.4的PBS洗涤2次后。再次离心，再加人体积.分数2.5%的度二醛(pH7.4的PBS稀释)，在4°C下F固定过夜(16h)，再次使用pH7.4的PBS冲洗，使用乙醇梯度脱水，冷冻干燥，喷重金属进行SEM观察并拍摄细胞形态。

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