D/L-缬氨酸对牙龈卟啉单胞菌及其生物膜的作用（二）

结果

2.1D-缬氨酸细胞毒性实验本实验采用CCK-8法通过评估不同浓度D-缬氨酸对L929细胞增殖的影响，以研究D-缬氨酸对L929细胞的细胞毒性｡结果如图1：培养第1､3､ 5天与对照组相比，D-缬氨酸在浓度为50mmol/L和75mmol/L时对L929细胞增殖的影响无显著性差异(P>0.05)；D-缬氨酸在浓度为100mmol/L，125mmol/L和150mmol/L时对L929细胞增殖的影响具有显著性差异(P<0.05)｡浓度为50mmol/L和75mmol/L和D-缬氨酸被用于进一步研究｡

2.2D-缬氨酸和L-缬氨酸对牙龈卟啉单胞菌活性的影响

本实验通过测定不同浓度的D-缬氨酸和L-缬氨酸与牙龈卟啉单胞菌共培养后的生长曲线，评估D-缬氨酸和L-缬氨酸对牙龈卟啉单胞菌生长的影响｡结果如图2：空白对照组在培养72h后浊度达到峰值，并持续12h后浊度开始下降，在96~144h内浊度保持｡与对照组相比：加入L-缬氨酸组(50mmol/L，75mmol/L)，生长曲线峰值在培养60h后出现，随即浊度开始下降，在96~144h内浊度保持与对照组无差异；加入50mmol/LD-缬氨酸组，生长曲线在60h前细菌浊度未见明显增长，60h后开始增加，并在108~144h保持，持续浊度与对照组无差异；加入75mmol/LD-缬氨酸组，细菌浊度在培养144h内无增长｡加入D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组实验结果等同于仅加入D-缬氨酸组｡

2.3生物膜形成

实验结晶紫染色分析结果如图3，生物膜形成抑制实验：共培养3d后，D-缬氨酸组(50mmol/L，75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(50mmol/L，75mmol/L)与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)｡L-缬氨酸(50mmol/L，75mmol/L)与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡共培养5d后，D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)；其他组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡生物膜分散实验：D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)；其他组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡

2.4D-缬氨酸和L-缬氨酸对牙龈卟啉单胞菌胞外多糖的影响

标准曲线如图4a，胞外多糖分析结果如图4b｡生物膜形成抑制实验：共培养3d后，D-缬氨酸组(50mmol/L，75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(50mmol/L，75mmol/L)与对照组相比胞外多糖含量明显较少，并具有显著性差异(P<0.05)｡L-缬氨酸(50mmol/L，75mmol/L)与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡共培养5d后，D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)与对照组相比胞外多糖量明显低于对照组，并具有显著性差异(P<0.05)；其他组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡生物膜分散实验：D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)胞外多糖量显著低于对照组(P<0.05)；其他组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)｡

2.5扫描电镜观察牙龈卟啉单胞菌生物膜不同浓度D-缬氨酸和L-缬氨酸对牙龈生物膜影响

电镜图如图5､6､7所示｡生物膜形成抑制实验：对照组培养第3天和第5天菌层厚度均大于4层，且细菌间相互附着，连接紧密｡与对照组相比，培养3d后D-缬氨酸组(50mmol/L，75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(50mmol/L，75mmol/L)生物膜细菌层数少于1层，细菌间无紧密连接｡孵育5d后D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)牙龈生物膜细菌层数少于1层，细菌间无紧密连接｡D-缬氨酸组(50mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(50mmol/L)牙龈生物膜细菌组细菌层数大于3层，再次形成紧密连接膜状结构｡3d和5d时，L-缬氨酸组(50mmol/L，75mmol/L)牙龈卟啉单胞菌菌层数均大于对照组，细菌间附着良好，紧密连接｡分散试验结果表明，D-缬氨酸组(75mmol/L)，D-缬氨酸与L-缬氨酸混合组(75mmol/L)细菌层数均小于2层，无完整生物膜结构，其他实验组菌群层数仍大于4层｡

声明：本文所用图片､文字来源《口腔医学研究》2020年7月第36卷第7期，版权归原作者所有｡如涉及作品内容､版权等问题，请与本网联系

相关链接：缬氨酸，单胞菌，结晶