响应面法优化牛舌草多糖提取工艺及其对DNA氧化损伤的保护作用（二）

（12）牛舌草多糖对DNA氧化损伤的保护作用

参考文献中的方法，取0.4mLlmmol/L的EDTANa溶液、0.4mL5mg/mL的DNA溶液、0.35mL5mmol/L的H₂O₂溶液、0.2mL3.2mmol/L的FeCl₃溶液和1mL不同质量浓度的精制多糖一磷酸缓冲溶液(浓度为0.2mol/L，pH=7.4)，加入0.35mL1.2mmol/L的VC溶液，在55℃水浴中反应，时间为20min，随后向试管中快速加入0.35mL0.3mol/L硫代巴比妥酸(TBA)溶液和0.75mL0.6mol/L三氯乙酸溶液，在105℃烘箱中显色15min，放冷后离心，取上清液测定532nm处吸光度，以磷酸缓冲溶液作为空白对照，根据下面的公式计算多糖对-OH诱导的DNA氧化损伤的保护作用：

其中：A₀为氧化损伤组(磷酸缓冲溶液+反应体系)吸光度；A₁为多糖保护组(多糖溶液+反应系)吸光度。

二、结果与分析

1、单因素试验结果与分析

（1）料液比对牛舌草多糖提取率的影响

精密称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，分别加入5mL、10mL、15mL、20mL、25mL蒸馏水，超声30min(室温，功率200W)，离心，得样品提取液，精密吸取牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量，结果见图1，从实验结果可以看出20mL溶剂的多糖含量最高，故选择0.5g药材加20mL蒸馏水(料液比为1∶40)作为提取溶剂的量。

（2）提取时间对牛舌草多糖提取率的影响

精密称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏水超声提取10min、20min、30min、40min、50min(室温，功率200W)，离心，得样品提取液，精密吸取牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量，结果见图2，从实验结果可以看出，超声30min和40min时多糖提取效率较高，但考虑到时间成本，因此选用超声30min作为提取时间。

(3)超声功率对牛舌草多糖提取率的影响

精密称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏水分别在50W、100W、150W、200W和250W超声提取30min，测定多糖含量，结果见图3，从实验结果可以看出，超声功率为200W时的多糖含量最高，因此选用200W作为超声提取功率。

（4）提取次数对牛舌草多糖提取率的影响

精密称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏在200W分别超声提取1次、2次、3次、4次和5次，每次30min，测定多糖含量，结果见图4，从实验结果可以看出，随着提取次数增加，多糖含量也升高，但提取3次后多糖含量升高不明显，因此选用超声3次作为提取次数。

2、响应面试验结果

（1）模型的建立和数据分析

根据单因素实验结果，以料液比(A)、提取时间(B)、超声功率(C)、提取次数(D)为实验因素，利用Design-Expert8.0.6软件设计四因素三水平实验分析，共计29个实验，响应面实验方案和结果见表3。

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