高效液相色谱法测定黑果腺肋花楸提取物中氯化矢车菊素的含量及抗氧化性研究（三）

4、体外抗氧化活性试验

（1）对DPPH自由基的清除能力

以质量浓度为横坐标，清除率为纵坐标作图，得到各样品质量浓度与DPPH自由基清除率的关系，试验结果见图2～5。由图2～5可知，随着各样品质量浓度的增加，对DPPH自由基的清除率均逐渐升高。当黑果腺肋花楸提取物供试液浓度为186.40μg／mL，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷供试液浓度为15.04μg／mL，氯化矢车菊素供试液浓度为5.19μg／mL，VC供试液的浓度为12.76μg／mL时，清除率均可达到50％，试验结果见表3，氯化矢车菊素对DPPH自由基的清除能力最强，黑果腺肋花楸提取物对DPPH自由基具有一定的清除活性。

（2）FRAP法测定总的抗氧化能力
以FeSO₄浓度C为横坐标，测得的吸光度A为纵坐标，进行线性拟合，得到FeSO₄标准曲线为：A=0.0262C一0.0275，R²=0.9996。将测得的样品吸光度值带入标准曲线方程，抗氧化活性以相同吸光度值的FeSO₄当量浓度表示，记为FRAP值。由图6～9可知，当VC样品液的浓度为7.27μg/mL，黑果腺肋花楸提取物供试液的浓度为157.7μg／mL，矢车菊素样品液浓度为11.35μg／mL，氯化矢车菊素样品液浓度为5.52μg/mL，硫酸亚铁当量浓度可达到30μg/mL，试验结果见表3，说明氯化矢车菊素的还原能力最强，黑果腺肋花楸提取物具有一定的还原能力。

（3）钼酸铵法测定总的抗氧化能力
以VC质量浓度为横坐标，测得的吸光度A为纵坐标，进行线性拟合，得到VC抗氧化能力标准曲线为：A=240.28C-101.67，R2=0.9966。将测得的样品吸光度值带入标准曲线方程，抗氧化活性以相同吸光度值的VC当量浓度表示。由图10～13可知，当氯化矢车菊素样品液的浓度为0.082mg／mL，黑果腺肋花楸花青素供试液的浓度为1.63mg／mL，矢车菊素样品液浓度为0.1722mg／mL，VC当量浓度可达到30μg／mL，试验结果见表3，说明说明氯化矢车菊素的还原能力最强，黑果腺肋花楸提取物具有一定的还原能力。
 

三、结论与讨论

1、本试验对黑果腺肋花楸提取物中氯化矢车菊素含量的HPLC测定方法进行考察，结果表明建立的含量测定方法操作简便，精密度高，重复性及线性关系良好；

2、本试验采用酸化甲醇溶液经沸水浴水解提取花青素，在相关文献的基础上，通过正交试验进一步考察了水解提取花青素工艺参数，试验结果表明，最佳提取工艺为：水解温度100℃、水解时间2h、溶剂酸浓度3％盐酸甲醇。在优化水解提取条件下，氯化矢车菊素的含量为1.8570mg／g。该方法操作简单，具有快速、高效、环保等优点，为黑果腺肋花楸果活性成分的提取提供了一种新方法；

3、体外抗氧化活性的试验结果表明：黑果腺肋花楸提取物对DPPH自由基具有一定的清除活性，随着其质量浓度的增加，清除活性明显增强，并且氯化矢车菊素对DPPH自由基的清除能力强于黑果腺肋花楸提取物；FRAP法和钼酸铵法测定各样品液总还原力，结果表明黑果腺肋花楸提取物具有一定的抗氧化活性，两种测定方法中氯化矢车菊素的抗氧化性最强。上述试验结果为黑果腺肋花楸果在食品、饮料、制药等领域的应用提供了工作基础，为黑果腺肋花楸果的工业化生产提供了理论依据。

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