响应面法优化超声辅助提取桦剥管菌多糖及其抗氧化活性研究（二）

（7）DPPH自由基清除力测定

根据DPPH与乙醇溶液显色，当有抗氧化剂存在时，使DPPH乙醇溶液颜色消退，从而导致吸光强度发生改变的方法测定DPPH自由基清除能力。参照Sun等的实验方法并做适当修改。分别精确配制0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL样品多糖溶液，用95％乙醇溶液配制0.2mmol/LDPPH溶液，依次在反应体系中加入2.0mLDPPH乙醇溶液(0.2mmol/L)和2.0mL不同浓度的多糖溶液。将反应体系混匀，在室温下静置30min，在517nm处测定各反应液的吸光值。空白组的多糖溶液由95％乙醇溶液代替。对照组用同等浓度的VC溶液代替多糖溶液。按照下式计算DPPH自由基的清除率。

DPPH自由基清除率(％)=(Ao-A)/Ao×100％，其中，Ao：空白组的吸光值；A：样品组的吸光值。

二、结果与分析

1、葡萄糖标准曲线的建立

以葡萄糖含量为横坐标，对应吸光值为纵坐标，建立标准曲线，得到线性标准曲线回归方程(如图2)：

2、桦剥管菌多糖提取的单因素实验

（1）水浴温度对桦剥管菌多糖得率的影响

从图3可以看出，水浴温度在40℃～70℃范围内时，随着水浴温度的增高，桦剥管菌多糖得率不断增加，当水浴温度达到70℃时，多糖得率最大，在水浴温度进一步增高时，多糖得率有所降低。当温度较低时，多糖的溶解与渗透能力较低，桦剥管菌多糖不易有效溶出。当温度较高时，高温“崩解”细胞并增强分子热运动，促使部分多糖链降解更易溶出。但当温度过高时，又会破坏多糖成分，引起多糖降解，从而导致提取率的下降。因此选择水浴温度60、70、80℃进行响应面优化实验分析。

（2）超声温度对桦剥管菌多糖得率的影响

从图4可以看出，桦剥管菌多糖得率随着超声温度的升高，呈现出先升后降的趋势，超声温度在70℃时，多糖得率最大，为7.28％，但与其他超声温度影响下的多糖得率相差不大，因此不选择超声温度进行后续的响应面优化实验分析。

（3）超声时间对桦剥管菌多糖得率的影响

从图5可以看出，超声时间在10～30min范围内时，随着超声时间的增加，桦剥管菌多糖得率为6.24％～6.99％，变化不明显，与其他因素相比较，超声时间影响较小，因此不选择超声时间进行响应面优化实验分析。

（4）超声功率对桦剥管菌多糖得率的影响

从图6可以看出，超声功率在60～100W的范围内，桦剥管菌多糖得率变化较明显，当超声功率在80W时，其多糖得率达到相对最大值，超声功率也是影响多糖得率的因素之一，多糖得率在超声功率为90W时下降可能是由于超声波过强的剪切力和冲击波对多糖分子有所破坏，导致多糖得率有所降低。因此选择超声功率70、80、90W进行响应面优化实验分析。

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