固相萃取-高效液相色谱-质谱联用检测牛奶中地塞米松残留（一）

地塞米松是一种人工合成的皮质类固醇，具有消炎、抗病毒、促进泌乳等多种功效，在养殖业中被大量使用，造成不同程度药物残留，人体摄入过量可能会引起激素代谢紊乱、肥胖、骨质疏松等病症，并可能产生致畸、致癌等风险。根据我国GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定，地塞米松在牛奶中的最大残留限量为0.3μg/kg。因此，为保障牛奶饮用安全，有必要建立一种安全、有效地分析牛奶中地塞米松残留的方法。

目前，地塞米松检测手段主要包括酶联免疫法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱法和液相色谱-质谱法等。其中，液相色谱-质谱联用法因其具有灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点，成为兽药残留检测最有效的方法，被广泛应用于牛奶中地塞米松残留的检测。本文基于农业部1031号公告-2-2008《动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测液相色谱-串联质谱法》，通过简化色谱条件，对比两种样品前处理方法的提取效果，改进标准曲线的绘制方式，旨在建立一种安全、高效、稳定的检测牛奶中地塞米松残留的方法，为相关研究提供借鉴。

一、材料与方法

（一）材料与试剂

学生饮用奶，大同市牧同乳业有限公司；地塞米松标准品（纯度98.7%),Bepure公司；甲醇、正己烷、乙酸乙酯（色谱纯），北京迪马欧泰科技发展中心；丙酮（分析纯），天津市科密欧化学试剂有限公司；Silica固相萃取柱（500 mg/3 m L）、有机滤膜（0.22μm），上海安谱实验股份科技有限公司。

（二）仪器与设备

LC-30AD高效液相色谱，LCMS-8050三重四极杆串联质谱仪（配有电喷雾离子源ESI），日本Shimadzu公司；ST40R高速冷冻离心机，美国Thermo公司；vortex genie 2涡旋混合器，美国SI公司；LE244S电子天平，德国Sartorius公司。

（三）试验设计

1. 标准溶液的配制。

准确称取地塞米松标准品用甲醇溶解配制成浓度为100μg/m L的标准贮备液。称取5份阴性牛奶样品2.00 g，分别准确加入稀释后的标准贮备液，按照下文步骤进行样品前处理，以最终定容体积得到浓度为1、2、5、10、50ng/m L的标准工作液。

2. 样品前处理。

（1）提取。称取牛奶样品2.00g于50 m L聚丙烯离心管中，加10 m L乙酸乙酯，涡旋混匀3 min，超声提取10 min，以8 000 r/min离心5 min，移取上层乙酸乙酯，在40℃水浴下氮气吹干，加3 m L乙酸乙酯-正己烷（1∶5,V∶V）振荡溶解残渣，待净化。（2）净化。将溶解液转移到固相萃取柱上（使用前以3 m L正己烷进行活化），自然流干，以3 m L正己烷淋洗，抽干。加3m L正己烷-丙酮（6∶4,V∶V）洗脱，收集洗脱液，在40℃水浴下氮气吹干，以20%乙腈水溶液定容至1 m L，过滤膜后待上机分析。

3. 色谱条件。

色谱柱为Shim-pack GIST C18(100×2.1 mm,2μm）；柱流量为0.3 m L/min；柱温40℃；流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相比例A∶B为50∶50；进样体积为10μL。

4. 质谱条件。

扫描方式为负离子扫描；接口电压4.0 k V;雾化气为氮气，3 L/min；加热气流量为10 L/min;DL温度为250℃；加热块温度为400℃；碰撞气为氩气，270 k Pa；检测方式为多反应检测（MRM）模式。质谱参数见表1。

二、结果与讨论

（一）色谱条件的优化

农业部1031号公告-2-2008标准[19]中通过3种流动相（水-乙腈-甲酸水）对多种糖皮质激素类药物进行梯度洗脱。考虑到本试验仅需检测地塞米松，因此，简化为2种流动相0.1%甲酸水-乙腈（50∶50,V∶V）进行等度洗脱，结果如图1所示，在此条件下，目标物在2 min前出峰，峰型良好，有效节约了分析时间。

（二）质谱参数的优化

以5 ng/m L地塞米松进行扫描，对其母离子、子离子、碰撞能量等条件进行优化，使分子离子和特征碎片离子强度达到最大，选择丰度最高的碎片离子作为定性与定量特征离子，优化后的质谱参数见表1。

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