采收月份对肉桂叶出油率及挥发油品质的影响研究（一）

樟科植物肉桂（Cinnamomum vassia Presl） 在我国植物资源丰富，主要分布于广西、广东、云南等地。肉桂油泛指从肉桂的干燥桂皮、桂枝、桂叶和果实等部位中提取而得的植物挥发油。肉桂油作为天然食用香料，具有抗氧化、抗炎、抗菌和防腐败等作用，可作为食品添加剂应用于果蔬、肉类食物的保鲜以及常见食品抗菌包装，在保健食品、食品包装、食品防腐以及医药等领域均具研究价值。肉桂油的主要成分为反式肉桂醛，此外还有苯甲醛、乙酸肉桂酯、邻甲氧基肉桂醛、香豆素等多种成分。反式肉桂具有镇静、镇痛、解热、抗惊厥、增强胃肠蠕动、利胆及抗肿瘤等作用，其含量是衡量肉桂油品质的重要指标。肉桂油在工业上通过水蒸气蒸馏法提取肉桂枝叶而得，传统提油率约为0.7％，而肉桂枝叶挥发油含量最高时超过1.8％。传统提油率低的原因之一是肉桂枝叶出油率随不同季节有所差异，而实际生产中肉桂枝叶采收期过长，导致肉桂枝叶原料中含油量偏低，达不到理想的出油率。目前关于肉桂原料叶方面的研究较少，缺少对肉桂枝叶采收月份方面的指导研究。因此，本实验选择肉桂叶挥发油主要成分肉桂醛的含量及其抑菌活性作为衡量肉桂油品质的两个指标，对不同采收月份的肉桂叶进行出油率、挥发油成分以及抑菌活性的测定，比较不同采收月份肉桂叶出油率及挥发油品质的差异，以期为肉桂行业选择适宜的肉桂枝叶采收期提供理论依据。

一、材料与方法

1、材料与仪器

营养琼脂：北京奥博星生物技术有限责任公司；营养肉汤（pH7.4±0.2）：广东环凯微生物科技有限公司；吐温一80：天津市富于精细化工有限公司；氯化钠AR、无水硫酸钠AR：西陇化工有限公司；丙酮AR：国药集团化学试剂有限公司。

QP2010型气相色谱一质谱联用仪：日本Shimadzu公司； SXKW型数显控温电热套：上海科恒实业发展有限公司；SW—CJ—IFD洁净工作台：苏州安泰空气技术有限公司；生化培养箱：

上海跃进有限公司；YX一24LDJ高压灭菌锅：江阴滨江医疗设备有限公司。

供试菌株金黄色葡萄球菌S. aureus ATCC6538、大肠杆菌E．coli ATCC25922、绿脓杆菌P. aeruginsoa ATCC27853购买于广东省微生物菌种保藏中心。

肉桂鲜叶分别于2018年1月～2018年12月每月13日上午，采摘自广西东兴市广西庚源香料有限责任公司林场内固定的5株肉桂，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为樟科樟属植物肉桂（Cinnamomum vassia Presl）的叶。肉桂叶阴干放置60d，备用。

2、实验方法

（1）肉桂叶挥发油的制备

分别称取各采收月份的肉桂叶样品3份，每份100.00g，横剪1～2cm，置于lL圆底烧瓶，加入1000mL水浸泡1h，用常规水蒸气蒸馏法进行回流提取5h，直至流出液无明显油珠为止，静置放冷，分液，加入无水硫酸钠干燥，即得到相应采收月份的肉桂叶挥发油。各采收月份的挥发油出油率取其3份平行实验的平均值。将各月份的3份油样合并，移液枪移取合并后的12份油发样各250μL，置于5mL容量瓶，丙酮定容至刻度，摇匀，得到GC—MS待测样品。

（2）肉桂叶挥发油成分分析

按照文献的色谱条件和质谱条件对12份样品进行分析，结果与NIST标准质谱库比对，分析鉴定各类化学成分。

（3） 肉桂叶挥发油最小抑菌浓度（MIC）的测定

采用微量肉汤稀释法测定12个采收月份的肉桂叶挥发油分别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的MIC。将12份肉桂叶挥发油分别溶于含1％吐温一80的营养肉汤中，采用连续二倍稀释法进行浓度稀释，具体操作见文献，第1～11孔的样品终浓度为100.00、50.00、25.00、 12.50、6.25、3.12、 1.56、0.78、0.39、0.20、0.10μL／mL的培养液。将100μL已配制的浓度为5×105CFU/mL的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的菌悬液分别加入到第1～2行、第3～4行和第5～6行的第1～11孔，加入200此相对应的菌悬液于第1～6行第12孔作为阴性对照，再加入100此营养肉汤于第7行1～11孔作为空白对照。放置于恒温培养箱37℃下培养20～24h后观察结果，肉汤出现浑浊表示有细菌生长，肉汤清澈澄明表示无细菌生长，1～11孔中无细菌生长的最小浓度则为MIC。

2、结果与分析

（1）肉桂叶挥发油的性状及出油率

水蒸气蒸馏提取获得的肉桂叶挥发油为黄色澄明液体，具有肉桂特殊的浓郁香气，味甜、辛。不同采收月份的肉桂叶出油率见表1，结果显示，12个月中10月采收的肉桂叶出油率最高（1.51％），6月份肉桂叶出油率最低（0.42％），与覃玉荣等报道的红芽肉桂枝叶6月出油率为全年最小值（0.37％）接近。广西防城港地区传统的春叶（即春季肉桂枝叶）采收期一般为4月上旬至6月上旬，高峰期在5月上旬；秋叶（即秋季肉桂枝叶）采收期为9月中旬至11月下旬，高峰期在10月上中旬。从表1可见，传统的春叶、秋叶采收期虽然分别包含了上半年和下半年肉桂叶出油率最高的月份（4月和10月），但由于采收期过长，导致也包含了上半年和下半年出油率最低的月份（6月和9月）。因此，从出油率方面考虑，春叶采收期可调整为从3月下旬至5月上旬，高峰期集中在4月；秋叶采收期调整为从9月下旬至11月上旬，高峰期在10月。

（2）肉桂叶挥发油成分分析

通过GC—MS分析鉴定不同采收月份肉桂叶挥发油的化学成分，得到总离子流图（见图1），利用峰面积归一化法计算各化合物所占的相对百分含量，结果见表2。

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